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丹參實驗室建設指南
3 丹參實驗室的主要技術流程
3.1 組培快繁技術體系
該體系旨在快速、大量地生產遺傳性狀一致的丹參種苗。
外植體選擇與消毒：優先選擇品性優良丹參植株的莖尖或幼嫩葉片作為外植體。外植體需經過嚴格的表面消毒（常用升汞或次氯酸鈉溶液處理），并用無菌水徹底沖洗。
初代培養與愈傷組織誘導：將消毒后的外植體接種到誘導培養基（如MS + 1.0 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BA）上，誘導產生愈傷組織。培養條件通常為22-25℃，光照12-16小時/天。
繼代培養與增殖：將結構疏松、生長旺盛的愈傷組織切割成約0.5厘米的小塊，轉接至新鮮的增殖培養基上進行擴增。此階段是快速繁殖的關鍵。
分化與生根：將愈傷組織轉接至分化培養基（如MS + 1.0 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA），誘導其分化出芽和根，形成完整植株。
煉苗與移栽：當組培苗生根且生長健壯后，將其移出培養瓶，洗凈根部培養基，移栽至滅菌的基質（如蛭石、營養土混合）中。在人工氣候室或溫室內逐步降低濕度、增強光照，使其適應外界環境，最終移栽至大田。
3.2 良種繁育與種子研究
實驗室的另一重要職能是進行種質資源創新與種子質量研究。
種質資源創制：利用甲基磺酸乙酯（EMS） 等化學誘變劑處理丹參種子，可創建突變體庫。例如，可先將種子用25 mg/L GA3溶液預處理12小時，再轉入0.7% EMS溶液中誘變20小時，以半致死率為篩選標準，尋找有益突變。此過程必須在通風櫥內進行，并妥善處理含EMS廢液（可用5%硫代硫酸鈉中和），確保人員安全。
種子質量檢測：建立種子內控質量標準，包括凈度、千粒重、發芽率、病蟲害情況等。對種子特性（如休眠機制、壽命）進行研究，為貯藏和播種提供依據。
3.3 藥材質量分析與控制
為確保丹參藥材的質量穩定可控，實驗室需建立嚴格的分析方法。
樣品制備：取丹參粉末（過三號篩）約0.3g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，超聲處理（功率140W，頻率42kHz）30分鐘，放冷后補重，過濾取續濾液作為供試品溶液。
薄層色譜（TLC）鑒別：采用硅膠G薄層板，以對照藥材和對照品（如丹參酮IIA、丹酚酸B）為參照，在日光和紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜應顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
高效液相色譜（HPLC）含量測定：使用C18色譜柱，以乙腈-0.02%磷酸溶液為流動相進行梯度洗脫，檢測波長270nm（測丹參酮類）或286nm（測丹酚酸B）。按干燥品計算，丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I的總含量不得少于0.25%（藥典標準）。所有分析方法在使用前均需進行方法學確認，確保其在實驗條件下的適用性。
4 質量管理、記錄與標準化運行
規范的體系是實驗室產出可靠數據和高品質種苗的保障。
標準化操作規程（SOP）：實驗室應建立覆蓋所有關鍵操作的程序文件，例如《培養基配制SOP》、《無菌操作SOP》、《HPLC儀器操作SOP》、《丹參藥材檢驗SOP》等。
全過程記錄制度：設計并使用規范的記錄表格，對實驗全過程進行追蹤。這包括但不限于：培養基配制記錄、培養條件記錄、田間物候期觀測記錄（萌發、開花、結果等）、水肥管理記錄、病蟲害防治記錄等。
人員培訓與職責：明確實驗室各崗位（如技術負責人、檢驗員、QA監督員）的職責。所有人員上崗前必須接受相關SOP和儀器操作的培訓，并定期考核。
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